Le Cénacle est également le lieu où, le jour de la Pentecôte étant arrivé, les apôtres se trouvaient tous ensemble (Ac 2,1). C'est le lieu où l'Eglise célèbre la venue de l'Esprit Saint, la naissance de sa dimension missionnaire.
La Pentecôte, cinquante jour après la Pâque, est d'abord une fête juive qui célèbre le don de la loi du SinaÏ. Des juifs du monde entier sont venus en pèlerinage à Jerusalem, ainsi que des prosélytes et des : "craignant Dieu". Remplis de zèle, enhardis, les Apôtres sortent de leur torpeur et annoncent un don nouveau, celui de l'esprit, Les pèlerins les comprennent tous, chacun dans sa propre langue. Pierre prêche la mort et la résurection du Christ. Les auditeurs ont le coeur transpercé (Ac 2, 37) et trois mille d'entre eux demandent le baptême.
Les voûtes de la pièce croisée résonnent aujourd'hui des chants à l'Esprit Saint des chrétiens de toute nationalité, de toute dénomination. Orthodoxe, protestants et évangéliques, catholiques, tous chantent à leur tour, parfois ensemble, l'appel à l'Esprit d'amour, de feu : "viens, esprit Saint, viens en nos coeurs !" Aujourd'hui encore, les coeurs s'ouvrent, les langues se mélangent, les voix s'unissent avec puissance dans une même prière.
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